Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

Јефтини ДИИ ГФП (Греен Флуоресцент Протеин) Иллуминатор

То није био неки језив фетиш који ме је натерао да прочитам Листу одгајивача црва.Радије је разговарао са Катхрин Хедгес - паметним, страственим и добро угледним научником и уметником - Тхе Газетте'с савете о јефтином ГФП осветљивачу. ГФП, или зелени флуоресцентни протеин, је флуоресцентни маркер који се често користи у молекуларној биологији и неуронауци.

Током мастер програма на Хумболт Стате Университи, Катхрин је, као и многи други научни истраживачи, била суочена са смањењем буџета и потешкоћама у проналажењу подршке. Да би наставила са радом на неуронима нематода у одељењу без кашњења када је имала потребу за новом опремом у 11. сату, Катхрин је ослободила моћ свог „да видимо како можемо да урадимо ово боље и јефтиније“ менталитет да хакујемо ДИИ ГФП илуминатор у бољи, истраживачки вредан систем, способан да визуелизује неуроне у малим црвима дугачким само 1 милиметар.

Зашто је то важно за Катхрин? Према њеним речима, „један од мојих сојева је наставио да бира против ГФП-а ако нисам изабрао најсјајније црве сваке генерације. Без начина да видимо ГФП на микроскопу за "сецирање", где сам покупио поједине црве малом жичаном лопатицом, нисам могао да гарантујем да ће сви њихови потомци бити флуоресцентни, што је проблем када покушавам да видим да ли третман их оштећује како би изгубио флуоресценцију. "

Резултат: “Једини микроскопи које смо имали са ГФП способностима били су непогодни за повећавање црва док су их померали, а куповина одговарајућег опсега би коштала хиљаде долара. У свом буџету сам оставио 750 долара, па сам потрошио око 80 долара на диоде ЛЕД и направио илуминатор. Није било довољно светло да би се виделе дуге танке ћелије, па сам потрошио 825 долара на филтере врхунског квалитета, спасио стари микроскопски окулар као фокусирајуће сочиво и користио је водоводне окови за монтажу на микроманипулатор који смо имали у лабораторији. Онда могу да одаберем своје најсјајније црве, подигнем поуздано сјајне црвићеве ларве и завршим своје експерименте. Да сам пратио већу функцију у ГФП-у, или сам користио Црвени флуоресцентни протеин, вероватно не бих могао да користим јефтине филтере и све то урадим испод $ 100. Ако бих наставио своје експерименте, могао бих да користим овај осветљивач када прелазим ГФП сојеве да видим који потомци имају оба ГФП маркера.

Катхрин-ов саветник за тезу је охрабрио овај тип експеримента, јер су он и његов саветник за тезу развили сопствену опрему за откривање нервне проводљивости у малом слатководном анелиду. Прототип и даље виси на огласној плочи преко његовог стола. Не само да подучава студенте физиологије животиња како неинвазивно раде неурофизиологију, он и његови студенти истраживања су објавили радове користећи овај метод за прикупљање података. Он је фан Бацкиард Браинс Спикер Бока и нада се да ће га видети у акцији.

Хаковањем сопственог алата, без претјераног трошка куповине просечног илуминатора за хиљаде долара (чак и коришћених), Катхрин је успела да заврши своју тезу. Илуминатор је користан за све научнике који се баве ДИИ и који морају да виде експресију ГФП или РФП (црвених флуоресцентних протеина) гена у бактеријама или ц. елеганс. А Катхрин је доказ да можеш то да урадиш за десет центи.

Детаљи о основном ГФП илуминатору од Гласник узгајивача црва су испод (након скока). Да бисте сазнали више о Катхрин-овим побољшањима, и да бисте видели њене белешке о црвима, погледајте њен пост Сплендид Цолорс.

[Поздрав Иану Цхин-Сангу и Веивеи Зхонгу]

Коришћење ЛЕД диода као јефтиног извора за откривање ГФП и ДсРЕД

Иан Цхин-Санг1 и Веивеи Зхонг Одељење за биологију, Куеен'с Университи, Кингстон, ОН, Канада, Одсек за биохемију и биологију ћелија, Универзитет Рице, Хјустон ТКС Кореспонденција са: Веивеи Зхонг ([емаил протецтед])

Компоненте за детекцију флуоресценције су прескупо за инсталацију у сваки стереоскоп. Често су наши флуоресцентни маркери веома светли и не захтевају пун капацитет такве опреме. Овде представљамо ЛЕД поставку која кошта само око 100 УСД и може да детектује светле флуоресцентне маркере као што је мио-2 :: ГФП. Постављање (слика 1) састоји се од:

  • Кс-ацто помаже руке или било шта што може да позиционира ЛЕД (Амазон.цом)
  • Кабл за лампу са прекидачем (локална продавница хардвера)
  • Кситаниум ЛЕД драјвер од 17 В (ЛЕД напајање)
  • Конектор Кситаниум драјвера (ЛЕД напајање)
  • Хладњак (ЛЕД напајање)
  • Спот лећа (ЛЕД напајање)
  • Лукеон В Стар држач за оптику (ЛЕД напајање)
  • Роиал-Блуе Лукеон В Стар ЛЕД за детекцију ГФП-а (ЛЕД напајање), или Греен Лукеон В Стар ЛЕД за дсРЕД детекцију (ЛЕД напајање)
  • Опциони филтер узбуде: Росцолук # 4290 ЦалЦолор 90 Блуе за ГФП, или # 389 Цхрома Греен за дсРЕД (Росцо.цом | Едмунд Оптицс)
  • Емисијски филтер: Росцолук # 12 Страв за ГФП, или # 19 Фире фор дсРЕД (доступност исто као ексцитацијски филтери)

Детаљи о томе како се овај уређај може ставити заједно могу се наћи овдје и овдје.

Слика 1. Подешавање ЛЕД-а

Слика 2. Коришћење ЛЕД подешавања за детекцију мио-2 :: ГФП у мИн1 животињи.

Слика 3. Коришћење ЛЕД подешавања за детекцију мио-2 :: дсРЕД.

Када монтирате ЛЕД на возача, проверите да ли се +/- завршава на ЛЕД-у, а крај неутралне / линије на каблу лампице у складу са онима на возачу. Користите непреводни лепак као што је силиконски лепак (Девцон, део бр. 12045, локална продавница) да бисте држач објектива ставили на ЛЕД. Узбудни филтер се може залијепити на сочиво наношењем мале количине љепила на руб. Емисиони филтер може се једноставно залијепити под микроскопски циљ.

Ова инсталација има дуг радни век, не захтева време загревања или хлађења и нема зрачење. Међутим, може детектовати само јаке сигнале. Користили смо подешавање за детекцију следећих маркера: мио-2 :: ГФП (слика 2), сур-5 :: ГФП, ајм-1 :: ГФП, и мио-2 :: дсРЕД (слика 3).

Коришћење ЛЕД диода као јефтиног извора за откривање ГФП и ДсРЕД


Био: Ери Гентри је биотехнолошки предузетник, организатор грађанске научне заједнице и суоснивач БиоЦуриоус-а, првог хакерског простора за биотехнологију, у подручју Сан Франциска.

Удео

Оставите Коментар